Nel 1652 un antico tiratoio dell'Arte della Lana situato in Via della Pergola, viene trasformato in teatro dall'Accademia degi Immobili, nata nel 1651 per iniziativa di un gruppo di nobili fiorentini che ora avevano bisogno di una sede più spaziosa ed elegante.
Nel 1657 con l'opera buffa Il podestà di Colognole, di Giovanni Andrea Moneglia, venne inaugurato Il Teatro della Pergola, che però solleverà il sipario per il pubblico pagante solo nel 1718, fino ad allora infatti fu esclusivamente Teatro di Corte utilizzato per feste e divertimenti.
Dal 1810 diviene Teatro Imperiale deputato al canto, alle opere serie e ai balletti. Ma il suo massimo splendore lo raggiunge tra il 1830 e il 1863, in quegli hanni la programmazione è a livelli altissimi, le opere dei più grandi compositori dell'epoca calcano le scene della Pergola, il 14 marzo del 1847 sul suo palcoscenico va in scena il Macbeth di Giuseppe Verdi in prima assoluta.
Ma non sono solo gli spettacoli a dare splendore al Teatro che in quello stesso periodo si arricchisce di una sala sfarzosa, il cosidetto Saloncino, un corridoio voltato finemente decorati, Sala Oro, e di un complicato sistma di argani e corde che permetteve di portare la platea allo stesso livello del palco.
Per tutti questi motivi il Teatro della Pergola nel 1925 viene dichiarato Monumento Nazionale, oggi è di proprietà dell'Ente Teatrale Italiano e ogni anno ospita oltre 250 manifestazioni.